RECONOCIMIENTO DE PRÓTIDOS

Reconocimiento De Prótidos

*Materiales:
- Tubos de ensayo
- Gradilla
- Mechero
- Vasos de precipitados
- Pipetas  
- Solución de albúmina al 1-2%
- Solución de HCl concentrado
- Alcohol etílico
- Solución de SO4Cu al 1%
- NaOH al 20%
- Clara de huevo o leche
*OBJETIVOS:
Comprobar qué le ocurre a una disolución de proteínas al variar la presión y la temperatura, sus causas y consecuencias


1)COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS:

*FUNDAMENTO:
Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria.

*TÉCNICA:

• Colocar en tres tubos de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo (puede diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3ml de leche.
• Calentar uno de los tubos al baño María, añadir a otro 2-3ml de HCl concentrado y al tercero 2 o 3ml de alcohol etílico.
• Observar los resultados.

*RESULTADOS OBTENIDOS:

Cuando calentamos la clara de huevo mezclada con agua observamos que se ha compactado totalmente, se ha convertido en sólido y blanco. Esto es debido a que al aumentar la temperatura se ha producido una desnaturalización y ha cambiado por tanto su conformación nativa, pasando de ser una mezcla espesa a ser sólida y ha cambiar su color a blanco.

Cuando mezclamos la clara de huevo y agua con 2-3ml de HCl, observamos como se ha mezclado todo y ha adoptado un color blanco, pero si que se ha quedado menos sólido que cuando calentábamos la clara al baño María. El hecho de que adopte ese color blanco se debe también a que se ha producido una desnaturalización debido al cambio en el pH, puesto que el ácido clorhídrico ha hecho disminuir el pH inical.

Al mezclarlo con alcohol etílico vemos una fase superior convertida en blanco (en la que por tanto se ha producido como en el experimento anterior una desnaturalización) y una fase inferior donde se queda la clara de huevo con su aspecto inicial, debido a que no se ha mezclado con el alcohol y por tanto no se ha producido desnaturalización y por ello, no ha cambiado su conformación nativa.

2)REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET) :

*FUNDAMENTO:

Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

*TÉCNICA:

• Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 1-2%.
• Añadir 4-5 gotas de solución de SO₄Cu al 1%.
• Añadir 3ml de solución de NaOH al 20%.
• Agitar para que se mezcle bien.
• Observar los resultados.

*RESULTADOS OBTENIDOS:
Al colocar la clara de huevo en un tubo de ensayo y añadirle la solución de SO4Cu al 1% de color azul turquesa, observamos que obtenemos un color azul fuerte. Luego al añadirle a esta mezcla el NaOH al 20%, se vuelve la disolución de un color azul más claro. Lo agitamos y finalmente podemos observar como el resultado es que la mezcla se torna de color violeta, lo que nos indica que efectivamente hay presencia de proteínas gracias a la reacción del Biuret, por la coordinación del Cu en medio alcalino, con los enlaces peptídicos de las proteínas de la clara del huevo.

CUESTIONES:


    1.   ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?

De forma rápida ya que cambia sus propiedades por efecto de un agente externo

   2.   ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?

Con el ácido clorhídrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene mayor pérdida de conformación nativa por ser éste un ácido fuerte y provocar cambios en sus propiedades.

  3.   ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?

Podríamos realizar sobre esa sustancia la reacción de Biuret para detectar la presencia de proteínas

  4.  ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?

Provoca una coloración violeta cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas

  5.  ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?

Sí, puesto que el reactivo reacciona con cualquier proteína ya sea líquida o sólida.

  6.  Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?

Será negativa porque si analizamos un solo aminoácido, no hay ningún enlace peptídico puesto que este   enlace se da entre dos aminoácidos, y la reacción de Biuret va a dar positivo cuando exista enlace peptídico (CO-NH) coordinándose con él el Cu en medio alcalino